[帮助]用于在没有质粒的情况下转化后检测蓝色和
摘要:[帮助]转化后无质粒的蓝白检测阳性菌落 同事,请帮我理解这个问题。将pGM-T载体转移到空的大肠杆菌DH5α中。所述重组载体通过电泳转化,证实了相对于空载体所需片段被连接,用于完
[帮助]转化后无质粒的蓝白检测阳性菌落
同事,请帮我理解这个问题。将pGM-T载体转移到空的大肠杆菌DH5α中。所述重组载体通过电泳转化,证实了相对于空载体所需片段被连接,用于完全感受态大肠杆菌状态的3分子克隆,制备和变换后被执行了。根据CaCl 2方法。
然后,选择蓝白斑(含有氨苄青霉素抗性斑块)16小时用于彩色显影20个阳性菌落后选择过夜振摇细菌。轻微提取质粒。电泳结果显示没有管具有质粒。
重复两次,这就是结果。
老师,拜托。首先,蓝色和白色斑点检测板在放入冰箱超过10小时4度后仍然可能是假阳性吗?
此外,第一次搅拌的质粒是否有可能丢失?
(附加氨苄青霉素)最后,这种情况的原因是什么?
谢谢分析,请指教!
对不起,我不知道蓝色和白色的斑点检测板是否在蓝色的板上仍然很小,并且在4度冰箱中10小时后没有变化。您需要在质粒提取过程中找出原因。质粒产量低的可能原因如下。1.大肠杆菌的状况不足或已经死亡。在捕获菌落的过程中,外部火焰的温度太高,并且接种环没有收集细菌的变量,这会杀死大肠杆菌。培养基3确定每种成分的正确比例,细菌含量高,但所用的工具和液体必须是无菌的4,参见培养条件,温度或搅拌。转速存在问题。观察搅拌后细菌溶液的浊度可以容易地判断是否存在上述情况。质粒不太可能克隆到抗性板中(嗯,它总是自我结合)。
这是一个小条?
我不知道用什么样的方法制作小质粒?
试剂是否正确?
菌落PCR是阳性的,但质粒没有。
我想这是一个细菌问题,因为当我抽一个小泵时我不能离心它。这是我第一次找到它!
感谢您对收集菌落和搅拌细菌(含有氨苄青霉素的LB)的热烈反应。每根管的浊度不同,但也很浑浊。
它非常混浊,无法提取。分子克隆3使用碱裂解法,并且在相同溶液中产生其他溶液。
加入溶液3后,沉淀物不是很浓缩,但将其固定在管壁上。
我不知道是否还有其他原因。
我也找到了。我想知道它是否是基因组中的遗传污染基因。我不知道我们是否添加了解决方案2。情况怎么样?
这是粘?
除非它是粘性的,否则就是NaOH的问题。
谢谢啦!
在飞623之后,在添加溶液2之后它是粘性的。
我的建议是它再次转换。“从理论上讲,把在冰箱中在4度蓝白色污物检测板,如果不变色板为10小时后的蓝色,误报是比较小的。”由于超过一次,累即使我每次都重定向,它也比分析的原因更快。
我会再做一次。
即使载体是自身结合的,也应该总是有质粒。
你的染料有问题吗?
有积极的控制还是MARKER?
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作者:365bet注册网址 来源:365bet足球开户 发布于2019-02-12 16:04
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